PROTOTIPO DE VACUNA ORAL PARA HEPATITIS E

Arce, Lorena^{1, 2}; Raya Tonetti, Fernanda^1,2; Raimondo, Paula³; Müller, Melisa ^1,2; Villena, Julio⁴ y Vizoso Pinto, María Guadalupe ^{1,2- 1} INSIBIO, Facultad de Medicina de la UNT (CONICET-UNT); ² Lab. Central de Cs. Básicas & Laboratorio de Genética Molecular, Or. Genética, Facultad de Medicina, UNT; ³ Facultad de Bioquímica, Química y Farmacia de la UNT; ⁴ CERELA (CONICET).

Objetivo. Evaluar la respuesta inmune sistémica y mucosa de la administración oral de la proteína de cápside ORF2 del HEV co-administrada con partículas inmunomoduladoras semejantes a bacterias (IBLP) como adyuvantes.
Metodología. La proteína RGSHis4-ORF2 se expresó en E. coli Rosetta, se purificó en resina de NiNTA en condiciones nativas y desnaturalizantes y se verificó por SDS-PAGE. Las IBLP de L. rhamnosus IBL027 y CRL1505 se obtuvieron por tratamiento ácido-calor a partir de cultivos o.n. y se controlaron por microscopía electrónica de transmisión. Se realizaron 3 inmunizaciones cada 14 días en ratones Balb/c de 4 semanas. Se administraron dos dosis (7,5 µg y 75 µg) de la proteína sola o con IBLP (1010). Se evaluó por ELISA la producción de anticuerpos en sangre (IgG) y en fluido intestinal (IgA). Se evaluó la respuesta inmune celular antígeno específica empleado células aisladas de placas de Peyer, mediante citometría de flujo y ELISA.
Resultados: Se clonó, expresó y purificó la proteína ORF2 de HEV. 14 días después de la última inmunización se detectaron anticuerpos específicos IgG e IgA en suero y fluido intestinal, respectivamente, cuando las proteínas fueron co-administradas con IBLPs. Los títulos de IgG en suero fueron ligeramente mayores cuando las proteínas fueron co-administradas con IBLP derivadas de L. rhamnosus CRL1505 que con IBL027 mientras que para IgA, se observó que IBL027 producían títulos más altos que CRL1505. En cuanto a la inmunidad celular, se observó un aumento en linfocitos B y T CD4+, pero no de T CD8+ luego de la estimulación con ORF2 ex vivo. La co-inmunización oral con ORF2 e IBLP también aumentó la producción de IFN-γ y TNF-α por células mononucleares antígeno-específicas aisladas de placas de Peyer. La proteína en condiciones nativas resultó más efectiva que en condiciones desnaturalizantes.
Conclusiones: Las IBLP derivadas de L. rhamnosus CRL1505 e IBL027 fueron efectivas para aumentar la inmunogenicidad de la proteína ORF2 de HEV por vía oral estimulando la inmunidad sistémica y de mucosa tanto humoral como celular al principal antígeno del HEV, la proteína de la cápside viral. Dada la necesidad de encontrar nuevos adyuvantes y vacunas de mucosa para infecciones por HEV y otros patógenos, el uso de estas partículas inmunomoduladoras presentan un gran potencial para el desarrollo de nuevas terapias preventivas.