MICROSCOPÍA ELECTRÓNICA PARA LAS CIENCIAS DE LA SALUD

Alvarado N. N,Galván F. S, Albarracín V.H. Centro de Investigaciones y Servicios de Microscopia Electrónica (CISME), CCT-CONICET, UNT, Tucumán, Argentina

Desde el año 1660 el microscopio óptico ha sido fundamental para el estudio de estructuras invisibles a nuestros ojos. Aunque su poder de resolución (1 um) aumentó a través del tiempo con la mejora de los sistemas ópticos,su crecimiento fue acotado debido a un factor limitante,la longitud de onda de la luz. Con el advenimiento de la microscopía electrónica (EM) que utiliza sistemas ópticos basados en lentes electromagnéticas y un haz de electrones de longitud de onda baja, se lograron observar estructuras con una resolución de 0.2nm en microscopía electrónica de transmisión (TEM) y 3 – 5 nm en barrido (SEM).

Si bien en sus inicios resultó una técnica costosa y de difícil acceso, hoy en día genera un alto valor en muchas áreas de estudio, siendo fundamental en la investigación clínica.

En la actualidad el estudio de biopsias renales y de piel se tornaron análisis de rutina en laboratorios de microscopía electrónica. También la ME ha sido útil en el estudio de procesos tumorales, en trastornos de almacenamiento, para identificar agentes infecciosos y marcadores moleculares. En trastornos dónde metales pesados pueden acumularse en células y  órganos, siendo EDX e EELS claves para el diagnóstico. Para evidenciar interacciones entre células, bacterias o proteínas con superficies, como es el caso de los biofilms que se forman en infecciones crónicas e implantes dentales.

Este trabajo tiene por objetivo exponer las técnicas y procedimientos para el procesamiento de muestras humanas utilizadas en el Centro de Investigaciones y Servicios en Microscopía Electrónica (CISME) – CONICET, el cual cuenta con dos microscopios, Libra 120 (TEM) y el Supra 55 VP (SEM).

Previo a la observación de las muestras se realiza el procesamiento. Primero se debe fijar en una solución de aldehídos (paradetener los procesos celulares), luego se deshidrata con soluciones de alcoholes crecientes y acetona.

Si se pretende analizar la ultrestructura celular, la muestra se procesa para TEMy debe ser lo suficientemente delgada para que los electrones puedan atravesarla, por tal motivo tras ser incluida en una resina plástica,  se realizan cortes con ultramicrótomo, luego se monta y se observa.

Para estudiar la topografía celular y/ o la composición elemental de la superficie de una muestra, se utiliza SEM. La muestra debe ser cubierta con oro para otorgarle conductividad y que los electrones incidentes puedan interactuar con ella. Tras la deshidratación, se realiza el  punto crítico, sputtering de oro, montaje y observación.

Para observar virus, fragmentos celulares o proteínas en su estado nativo (acuoso), se realiza la técnica de tinción negativa, la cual consta de embeber la muestra en una sal de un metal pesado, que perfila detalles ultraestructurales sobre un fondo oscuro.

Si bien la ME es una herramienta fundamental para la resolución de problemas en el área de la investigación, ésta también es un elemento eficiente y disponible para el diagnóstico médico.